Изисквания за тестване на комплекти ELISA

Направете добър контраст във формалния тест, трябва да се вземат условията на теста за положителна и отрицателна контрола и пробите, които ще се тестват, трябва да бъдат направени в две копия, за да се гарантира точността на резултатите от теста.

Понякога фонът е по-висок, което показва неспецифична реакция, може да се затвори с овчи серум, заешки серум или BSA.

Избор на експериментални условия

При ELISA е важно да се изберат различни експериментални условия, включително: (1) Избор на твърдо{1}}фазови носители: Много вещества могат да се използват като твърдо{2}}фазови носители, като PVC, полистирен, полиакриламид и целулоза. Може да бъде под формата на вдлъбната плоча, епруветка, перла и т.н. Понастоящем обикновено се използва за 40-ямкови полистиренови вдлъбнати плочи.

Без значение какъв вид носител, преди употреба може да бъде скриниран: със същото количество антигенен пакет е, при същите експериментални условия, за да реагира, за да наблюдава дали неговата реакция на цветопредаване е хомогенност, според която е добра адсорбционна производителност. (2) Опаковка по селекция на антитяло (или антиген): антитяло (или антиген), адсорбирано върху повърхността на твърдо-фазовия носител, строгостта на изискванията е по-добра, адсорбцията обикновено изисква PH между 9,0 до 9,6. Температурата на адсорбция, времето и количеството протеин също имат определено влияние, обикновено повече от 4 градуса C от 18 до 24 часа. Оптималната концентрация на протеиновите опаковки трябва да бъде титрувана: след опаковане с различни протеинови концентрации (0,1, 1,0 и 10 µg/ml и т.н.), стойностите на ОП на положителните проби се наблюдават, когато другите условия на теста са същите. Изберете концентрацията с най-голяма OD стойност и най-ниско количество протеин.

За повечето протеини обикновено е 1 до 10 µg/ml. (3) Избор на работна концентрация на белязано с ензим-антитяло: първо, първоначалният ефект от титруването с помощта на директния метод ELISA (вижте частта за белязано с ензим-антитяло).

След това фиксирайте други условия или вземете „метода на квадратната матрица“ (опаковка, референция за пробата, която ще се изследва, и ензимно-белязаните антитела са различни разреждания) във формалната експериментална система титрира точно своята работна концентрация. (4) Изборът на основата на ензима и донора на водород: изборът на донор на водород е евтин, безопасен, с ясна реакция на цветопредаване и самият той е безцветен. Някои донори на водород (напр. OPD и др.) имат потенциални канцерогенни ефекти, трябва да се внимава за защита. Условните хора трябва да използват не-канцерогенни, високочувствителни донори на водород, като TMB и ABTS, които в момента са по-задоволителни донори на водород. След период на действие трябва да се добавят силни киселини или основи, за да се спре реакцията. Обикновено времето за действие на субстрата е 10-30 минути. Течността за използване на субстрата трябва да се приготви прясно, особено ако се добави H2O2 преди употреба.